組織總磷含量檢測(cè)試劑盒案例操作
產(chǎn)品說(shuō)明： 磷的存在形態(tài)包括無(wú)機(jī)磷與有機(jī)磷。無(wú)機(jī)磷主要指根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代 謝、蛋白質(zhì)化和脫化等。通過(guò)測(cè)定總磷與無(wú)機(jī)磷含量即可了解作物對(duì)磷的利用率，進(jìn)而為合理施肥提供 依據(jù)。總磷經(jīng)消化后，轉(zhuǎn)化成無(wú)機(jī)磷。鉬藍(lán)法是測(cè)定無(wú)機(jī)磷含量的經(jīng)典方法，一定條件下，鉬藍(lán)與根生成660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定660nm光吸收，即可計(jì)算無(wú)機(jī)磷含量，進(jìn)而可計(jì)算出組織中總磷含量。
技術(shù)指標(biāo)：
咀低檢出限：0.0585 mmol/L
線性范圍：0.0625-2 mmol/L
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品： 可見(jiàn)分光光度計(jì)、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水和濃硫酸。
操作步驟：
一、有機(jī)磷消化（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)） 稱取約 0.1 g 組織于帶蓋試管中，加濃硫酸 1.0 mL，蓋緊（封口膜封口，防止水分散失）后沸水浴 10min 左 右，待溶液呈黑色或棕色時(shí)取出。稍冷后，加試劑一 200μL，充分混勻，蓋緊后繼續(xù)沸水浴，直到溶液呈透明狀， 取出室溫冷卻后，加蒸餾水 3.8 mL，充分混勻；室溫，10000rpm，離心 10min，取上清液，待測(cè)。
注意事項(xiàng)：
1、試劑三需臨用前配制，限當(dāng)天使用。
2、測(cè)定前先用 1~2 個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如吸光值大于 0.8 時(shí)，需用蒸餾水做相應(yīng)稀釋。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例： 1、 取 0.1g 腎臟按照提取步驟操作，離心取上清之后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算 A 測(cè)定=0.273，A 空白=0.016， A 標(biāo)準(zhǔn)=0.429，按樣本質(zhì)量計(jì)算總磷含量得： 總磷含量(mmol/g 質(zhì)量)= 0.005×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 質(zhì)量。 2、 取 0.1g 脾按照提取步驟操作，離心取上清之后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算 A 測(cè)定=0.268，A 空白=0.016，A 標(biāo)準(zhǔn)=0.429，按樣本質(zhì)量計(jì)算總磷含量得： 總磷含量(mmol/g 質(zhì)量)= 0.005×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 質(zhì)量。
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